【作者】 雷琳
【关键词】 脂肪酸位置分析 野生淡水鱼 鄱阳湖 纯化 食物链 脂类
【导师姓名】邓泽元;李静
【学位名称】硕士
【学位年度】2012
【授予单位】南昌大学
【分类号】 S917.4
【录入时间】2017-05-14
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【摘要】本研究比较了7种一年龄养殖和鄱阳湖野生淡水鱼(青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲫鱼、鲤鱼和鲶鱼)肌肉中脂肪酸的组成和含量,并对鄱阳湖一年龄野生四大家鱼(青、草、鲢、鳙)及其食物链上的螺、菰、芦草、浮游植物和浮游动物的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids, PUFA)及奇数和支链脂肪酸(odd-branched chain fatty acids, OBCFA)的相关性进行了探讨。采用95%乙醇为流动相和短床层硅胶柱,通过单因素实验对分离鱼油甘油三酯(triacylglycerols, TAG)、脑磷脂(phosphatidylethanolamine, PE)和卵磷脂(phosphatidylcholine, PC)的条件进行优化,并通过高效液相色谱(high-performance liquid chromatography/ultraviolet detector, HPLC-UV)测定了产物PE和PC的纯度。通过薄层色谱(thin layer chromatography, TLC)与气相色谱(gas chromatography, GC)连用,测定了鄱阳湖野生四大家鱼TAG、PE和PC脂肪酸的位置分布。主要研究内容及结果如下：1.与养殖淡水鱼相比,鄱阳湖的野生淡水鱼total PUFA和total OBCFA含量均更高。在所研究的几种鱼中,野生鲤鱼total PUFA含量最高,为39.53%；野生鲫鱼和鲤鱼18：2n-6含量高达27%以上；野生青鱼20：4n-6含量最高,为11.68%；养殖鳙鱼20：5n-3含量最高,为6.27%；养殖和野生鲶鱼22：5n-3含量最高,均为2.41%；22：6n-3在野生鳙鱼中的含量最为丰富,为12.24%；野生青鱼total OBCFA含量最高,为7.65%。7种淡水鱼均含有一定量的共轭亚油酸(conjugated linoleic acids, CLA),其中养殖鱼为0.28-1.59%,野生鱼为0.32-2.67%。某些淡水鱼(如鳙鱼和鲶鱼)total PUFA的含量接近甚至高于一般海水鱼。在初步探索了鄱阳湖不同食性的野生四大家鱼及其食物链脂肪酸的相关性后,发现野生四大家鱼与其对应食物源PUFA的相关性(r)均大于0.8,OBCFA相关性(r)均大于0.6,且从食物中获取的脂肪酸能很好地被吸收转化为鱼体成分。20:5n-3、22:6n-3、total n-3long chain PUFA (n-3LCPUFA, C≥20)含量为浮游动物浮游植物螺水草,故这些脂肪酸在喜食浮游动物的鳙鱼中含量最高,在喜食浮游植物的鲢鱼和喜食底栖动物的青鱼中次之,在喜食水草的草鱼中最低；22：5n-6的含量为浮游动物(0.91%)螺(0.83%)浮游植物(0.66%)水草(未检测到),故22：5n-6在鱼体内的含量为鳙鱼(3.46%)青鱼(1.87%)鲢鱼(1.13%)草鱼(0.77%)；total OBCFA的含量为螺(11.27%)芦草(10.09%)浮游动物(8.52%)浮游植物(3.31%),故鱼中total OBCFA含量为青鱼(7.65%)草鱼(5.87%)鳙鱼(5.25%)鲢鱼(4.77%)。2.本研究以鄱阳湖鱼油为原料,采用规格为φ22mm×100mm的玻璃柱,通过单因素实验优化中性脂洗脱剂、硅胶型号、上样量和硅胶床层高度,得到分离TAG、PE和PC的最佳条件为：当上样量／床层高度为0.25g/40mm,硅胶颗粒大小为54-74μm,200mL乙酸乙酯为中性脂洗脱剂,500mL乙醇(95%)为磷脂(phospholipids, PL)洗脱剂,流速为1.4mL/min。该方法简单快速,一步就可得到纯度大于96%的PE(5.13g/100g鱼油)和PC(1.58g/100g鱼油),以用于营养、医药和化妆品行业,且乙酸乙酯和乙醇对人体及环境危害较小适用于工业纯化PE和PC。3.4种野生鱼的TAG中,鳙鱼n-3PUFA含量最丰富为32.52%,且其n-6/n-3PUFA最低为0.26。PL富含PUFA,且total PUFA含量在PL中为PEPCTAG。4种野生鱼中,total CLA在TAG中的含量(0.54-2.85%)大于PL(0.27-1.48%)；total OBCFA在TAG中的含量(4.19-5.33%)大于PL(3.03-4.36%)。研究结果表明,脂肪酸在甘油上的酰化位置并不是随机分布的：TAG中,16：0、18：2n-6、22：5n-6、22：5n-3和22：6n-3优先分布在sn-2-位上,而18：0、18：1n-9、18：3n-3、20：4n-6和20：5n-3主要分布在1、3位上；总单不饱和脂肪酸(total monounsaturated fatty acids, total MUFA)和total PUFA在1、3位上占优势,而总饱和脂肪酸(total saturated fatty acids, total SFA)主要分布在sn-2位上。PL中,16：0、18：0、18：ln-9、18：2n-6和18：3n-3优先分布在PL的sn-1-位上；LCPUFA (20:4n-6、20:5n-3、22:5n-6、22:5n-3和22：6n-3)则主要分布在PL的sn-2-位上；total SFA和total MUFA在sn-1位上占优势,而total PUFA主要分布在sn-2位上。...
【全文】本研究比较了7种一年龄养殖和鄱阳湖野生淡水鱼(青鱼、草鱼、鲢鱼、鳙鱼、鲫鱼、鲤鱼和鲶鱼)肌肉中脂肪酸的组成和含量,并对鄱阳湖一年龄野生四大家鱼(青、草、鲢、鳙)及其食物链上的螺、菰、芦草、浮游植物和浮游动物的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids, PUFA)及奇数和支链脂肪酸(odd-branched chain fatty acids, OBCFA)的相关性进行了探讨。采用95%乙醇为流动相和短床层硅胶柱,通过单因素实验对分离鱼油甘油三酯(triacylglycerols, TAG)、脑磷脂(phosphatidylethanolamine, PE)和卵磷脂(phosphatidylcholine, PC)的条件进行优化,并通过高效液相色谱(high-performance liquid chromatography/ultraviolet detector, HPLC-UV)测定了产物PE和PC的纯度。通过薄层色谱(thin layer chromatography, TLC)与气相色谱(gas chromatography, GC)连用,测定了鄱阳湖野生四大家鱼TAG、PE和PC脂肪酸的位置分布。主要研究内容及结果如下：1.与养殖淡水鱼相比,鄱阳湖的野生淡水鱼total PUFA和total OBCFA含量均更高。在所研究的几种鱼中,野生鲤鱼total PUFA含量最高,为39.53%；野生鲫鱼和鲤鱼18：2n-6含量高达27%以上；野生青鱼20：4n-6含量最高,为11.68%；养殖鳙鱼20：5n-3含量最高,为6.27%；养殖和野生鲶鱼22：5n-3含量最高,均为2.41%；22：6n-3在野生鳙鱼中的含量最为丰富,为12.24%；野生青鱼total OBCFA含量最高,为7.65%。7种淡水鱼均含有一定量的共轭亚油酸(conjugated linoleic acids, CLA),其中养殖鱼为0.28-1.59%,野生鱼为0.32-2.67%。某些淡水鱼(如鳙鱼和鲶鱼)total PUFA的含量接近甚至高于一般海水鱼。在初步探索了鄱阳湖不同食性的野生四大家鱼及其食物链脂肪酸的相关性后,发现野生四大家鱼与其对应食物源PUFA的相关性(r)均大于0.8,OBCFA相关性(r)均大于0.6,且从食物中获取的脂肪酸能很好地被吸收转化为鱼体成分。20:5n-3、22:6n-3、total n-3long chain PUFA (n-3LCPUFA, C≥20)含量为浮游动物浮游植物螺水草,故这些脂肪酸在喜食浮游动物的鳙鱼中含量最高,在喜食浮游植物的鲢鱼和喜食底栖动物的青鱼中次之,在喜食水草的草鱼中最低；22：5n-6的含量为浮游动物(0.91%)螺(0.83%)浮游植物(0.66%)水草(未检测到),故22：5n-6在鱼体内的含量为鳙鱼(3.46%)青鱼(1.87%)鲢鱼(1.13%)草鱼(0.77%)；total OBCFA的含量为螺(11.27%)芦草(10.09%)浮游动物(8.52%)浮游植物(3.31%),故鱼中total OBCFA含量为青鱼(7.65%)草鱼(5.87%)鳙鱼(5.25%)鲢鱼(4.77%)。2.本研究以鄱阳湖鱼油为原料,采用规格为φ22mm×100mm的玻璃柱,通过单因素实验优化中性脂洗脱剂、硅胶型号、上样量和硅胶床层高度,得到分离TAG、PE和PC的最佳条件为：当上样量／床层高度为0.25g/40mm,硅胶颗粒大小为54-74μm,200mL乙酸乙酯为中性脂洗脱剂,500mL乙醇(95%)为磷脂(phospholipids, PL)洗脱剂,流速为1.4mL/min。该方法简单快速,一步就可得到纯度大于96%的PE(5.13g/100g鱼油)和PC(1.58g/100g鱼油),以用于营养、医药和化妆品行业,且乙酸乙酯和乙醇对人体及环境危害较小适用于工业纯化PE和PC。3.4种野生鱼的TAG中,鳙鱼n-3PUFA含量最丰富为32.52%,且其n-6/n-3PUFA最低为0.26。PL富含PUFA,且total PUFA含量在PL中为PEPCTAG。4种野生鱼中,total CLA在TAG中的含量(0.54-2.85%)大于PL(0.27-1.48%)；total OBCFA在TAG中的含量(4.19-5.33%)大于PL(3.03-4.36%)。研究结果表明,脂肪酸在甘油上的酰化位置并不是随机分布的：TAG中,16：0、18：2n-6、22：5n-6、22：5n-3和22：6n-3优先分布在sn-2-位上,而18：0、18：1n-9、18：3n-3、20：4n-6和20：5n-3主要分布在1、3位上；总单不饱和脂肪酸(total monounsaturated fatty acids, total MUFA)和total PUFA在1、3位上占优势,而总饱和脂肪酸(total saturated fatty acids, total SFA)主要分布在sn-2位上。PL中,16：0、18：0、18：ln-9、18：2n-6和18：3n-3优先分布在PL的sn-1-位上；LCPUFA (20:4n-6、20:5n-3、22:5n-6、22:5n-3和22：6n-3)则主要分布在PL的sn-2-位上；total SFA和total MUFA在sn-1位上占优势,而total PUFA主要分布在sn-2位上。